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鏡檢組織的凍干步驟

   2022-04-14 sj33
核心提示:鏡檢組織的凍干步驟

鏡檢組織的凍干按下述步驟進(jìn)行。

(1)凍結(jié)軟的動(dòng)物組織應(yīng)先用明膠包在組織周圍,采用雙刃刀片切成厚度在1mm以下的薄片,將其放在金屬片上快速投人用液氨冷到一150℃左右的冷風(fēng)中,瞬間就會(huì)凍結(jié),這時(shí)試料的冷卻速率約為10℃/min。

(2)于燥在預(yù)先冷卻到一50℃以下的試料臺(tái)上,移動(dòng)凍結(jié)試料,迅速抽真空排氣開始干燥。干燥過程中,試料的溫度希望低于再結(jié)晶或抑制冰晶生長的溫度。但從冰的蒸氣壓來看,在10~3Pa的真空中,溫度在一90℃以下,冰無法升華,即使在一80℃左右,也被認(rèn)為是極限升華溫度,因此生物組織凍干時(shí)一般將制品冷卻到一70℃左右。至于試料溫度和干燥速率的關(guān)系,用斯梯芬森圖表示。從該圖可知,隨升華溫度的降低干燥時(shí)間急劇增加。

由于干燥的水分是微量的,因此決定干燥終點(diǎn)是困難的。一般是按經(jīng)驗(yàn)或者推定來決定干燥的終點(diǎn)。表7-7列出了一些材料的干燥時(shí)間參考值。

(3)包埋顯微鏡的標(biāo)本可不用石蠟包埋,而用于電子顯微鏡的標(biāo)本需用樹脂包埋。預(yù)先將樹脂熔化并排除氣體,而后在其中放入干燥完了的試料。如果包埋劑和試料沒有很好地排氣,在真空中就有起泡的危險(xiǎn)。

(4)切片包埋完畢,從真空中取出,再按-一定形式切片、染色,最后進(jìn)行鏡檢。


 
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